这到底是什么意思？它指典型的落射荧光照明复合显微镜无法分辨或区分距离小于200m的两个物体。此外，因为整个样品被同时照射，所以样品中所有聚焦和离焦的光线都被检测到。这些限制意味着，根据物镜中的镜片，您可能能够确定一个细胞中的两个不同颜色的探针，但是如果没有很多对照、单像素分析和计算，就无法分辨它们之间的空间关系。此外，因为您没有掌握任何深度相关信息，所以无法从落射荧光显微镜拍摄的图片中得到关于体积的可靠结论。通过了解系统的限制，您能够对获得的数据和图像更加确信，也能够完全理解您的数据并明确表达结论。

激光扫描共聚焦显微镜也依赖于复合光显微镜设置，但能够获得更高的分辨率。其分辨率的提高源于使用激光作为照明，其将激发光范围缩窄到~2-3nm。这比使用激发滤光片组准确十倍。此外，一次实验中只从一个焦平面获得图像，使用针孔阻挡离焦光线到达检测仪，可以去除所有分散和离焦光线，从而提高了分辨率对单个焦平面的限制，这被称为选择性分区。这种针孔只允许来自样品很窄区间的光线通过，所以能够改善深度方面的信息。这比使用落射荧光获得的分辨率有所提高，落射荧光收集一个细胞中很多焦平面的光线。科研人员也可以通过其他选择获得更高的分辨率，但是这些方法更加专业化，并需要更多的技术知识才能着手。

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